【摘要】 目的 为探讨含蔗糖外甜味素的天然植物果——罗汉果对变形链球菌(简称变链菌)致龋作用的影响。方法 用实验室比浊法观察罗汉果浸出液对变链菌的生长、玻棒粘附和产酸的影响，并设蔗糖、甜菊糖、果糖和葡萄糖实验组与其比较。结果 显示变链菌在罗汉果试验液中的生长及酵解明显低于其它实验组，包括甜菊糖组(P＜0.01)；变链菌对玻棒的粘附在罗汉果组中最低。结论 罗汉果甜度高、粘度小，其抑制变链菌致龋作用优于甜菊糖，提示了它可能作为无致龋性甜味剂的应用前景。
【关键词】 罗汉果 链球菌，变异 防龋性
Anti-cariogenicity of maceration extract of Momordica grosvenori： laboratory study Mu Jing. Zhuhai Institute of Prevent and Treatment of Oral Diseases, Zhuhai 519000
【Abstract】 Objective To study the anti-cariogenicity of Momordica grosvenori a kind of natural sweet fruit.Methods The turbiding method in laboratory was used to test the influence of the maceration extract of Momordica grosvenori on the growth of Streptococcus mutans (S.mutans), glass rod adhering, and acid production. Sucrose, glocose, fructose, beet sugar were designed to compare with Momordica grosvenori. Results The growth and fermentation of S. mutans in Momordica grosvenori were significantly lower than these in the other groups includintg beet sugar group (P＜0.01). S. mutans adhering glass rod in Momordica grosvenori was the lowest.Conclusion Momordica grosvenori possesses many advantages: high sweetness and low adherence, and its anti-cariogenicity is better than beet sugar.
【Key words】 Momordica grosvenori Streptococcus mutans Anti-cariogenicity
现代研究表明，蔗糖的摄入与龋齿的形成密切相关，为此国内外学者致力寻找有甜味而无致龋性或低致龋性的糖代用品。如帕拉金糖、甜菊糖等都已被证明能减少龋齿的发生［1］。
罗汉果是一种天然无毒、含蔗糖外甜味素的植物果。有研究表明其甜度约为蔗糖的300倍，可作为糖尿病患者和肥胖等不宜吃糖者的替代品［2］；华南地区民间有冲泡罗汉果作为日常饮料的习惯，而罗汉果对变形链球菌(简称变链菌)的生长影响尚未见报道。为了探讨其对变链菌致龋作用的影响，本实验就变链菌在罗汉果浸出液中的生长、玻棒粘附和产酸情况作了相关研究，并与蔗糖、葡萄糖、果糖和甜菊糖进行了比较。
材料和方法
1.实验材料：实验用血清C型变链菌菌株，由华西医科大学口腔医学院提供。取一支冻干菌株接种于TS培养基中增菌，37℃ 48小时厌氧培养、离心、洗涤，用UV-754分光光度计调整菌液OD=1.0，此为实验用菌液。
罗汉果由珠海市药材公司提供，取优质干果50g剪成碎块，加煮沸蒸馏水至500ml，60℃恒温浸提过夜，定量滤纸过滤。该滤液浓度为10%。
2.实验方法：在基础培养液(成分：2%Trypticase, 0.2% NaCl, 0.3% K2HPO4, 0.2%KH2PO4，0.1%K2CO2，0.012%MgSO4，0.0015% MnSO4，适量酵母浸汁和半胱氨酸)中分别加入5%的罗汉果、甜菊糖、蔗糖、葡萄糖和果糖；另在5%的罗汉果培养基中再加入5%的蔗糖，设未加糖的基础培养液为阴性对照组，共7组［3］。
将上述7组试验液15ml分装于试管内，各加菌液1ml，37℃厌氧培养48小时，离心(2 000r/min)20分钟，测出上清液pH值。流动生理盐水洗涤2次，分光光度计比浊，测出变链菌的生长量。
取1ml菌液接种于装有20ml各试验液的试管中，插入直径为0.5cm的玻棒，厌氧培养48小时，取出玻棒，生理盐水冲洗10秒钟。用0.1mol/L NaOH溶液将玻棒上粘附的菌细胞洗脱下来，离心、洗涤、比浊，用分光光度计测出变链菌对玻棒的粘附能力。以上实验相同方法重复6次。
结果
1.各实验组对变链菌的生长影响，见表1。
表1 各实验组变链菌生长的方差统计
| 实验组 |
OD值( ±s) |
P值 |
与对照
组比较 |
与蔗糖
组比较 |
与罗汉果
组比较 |
| 蔗糖 |
2.71±0.08 |
<0.01 |
|
<0.01 |
| 葡萄糖 |
2.87±0.25 |
<0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 罗汉果+蔗糖 |
2.66±0.04 |
<0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 果糖 |
2.60±0.17 |
<0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 甜菊糖 |
1.75±0.08 |
<0.01 |
<0.01 |
<0.01 |
| 罗汉果 |
0.30±0.14 |
>0.5 |
<0.01 |
| 阴性对照 |
0.17±0.02 |
表1所示变链菌在罗汉果和甜菊糖试验液中的生长明显低于蔗糖、葡萄糖和果糖(P＜0.01)；在罗汉果中生长又明显低于甜菊糖(P＜0.01)，与阴性对照组相似(P＞0.5)。说明罗汉果、甜菊糖不利于变链菌的生长，罗汉果优于甜菊糖。
在罗汉果试验液中加入蔗糖后变链菌生长量与蔗糖组相似(P＞0.5)，与罗汉果组差异有显著性(P＜0.01)，说明罗汉果与蔗糖配伍后对变链菌生长无抑制作用。
2.各实验组中变链菌对玻棒的粘附，见表2。
表2 各实验组变链菌对玻棒粘附的方差统计
| 实验组 |
OD值(±s) |
P值 |
与对照
组比较 |
与蔗糖
组比较 |
与罗汉果
组比较 |
| 蔗糖 |
1.943±0.278 |
<0.01 |
|
<0.01 |
| 罗汉果+蔗糖 |
1.860±0.117 |
<0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 果糖 |
0.987±0.022 |
<0.01 |
＜0.01 |
<0.01 |
| 甜菊糖 |
0.883±0.052 |
<0.01 |
<0.01 |
>0.5 |
| 葡萄糖 |
0.882±0.096 |
<0.01 |
<0.01 |
>0.5 |
| 罗汉果 |
0.678±0.015 |
<0.01 |
<0.01 |
| 阴性对照 |
0.093±0.011 |
表2所示变链菌对玻棒的粘附，蔗糖组明显高于果糖、葡萄糖、甜菊糖和罗汉果(P＜0.01)，而在罗汉果组中粘附最低。罗汉果中加入蔗糖则明显提高了变链菌对玻棒的粘附性。
3.各实验组中变链菌产酸的分析见表3。变链菌在各实验组中培养48小时后的pH值表明，变链菌在罗汉果液中的酵解明显低于其余各实验组，包括甜菊糖组(P＜0.01)，与阴性对照组相似(P＞0.5)。而在罗汉果液中加入蔗糖后，pH值明显降低，与蔗糖组相似(P＞0.5)。
表3 各实验组变链菌产酸的方差统计
| 实验组 |
pH值(±s) |
P值 |
与对照
组比较 |
与蔗糖
组比较 |
与罗汉果
组比较 |
| 蔗糖 |
4.42±0.01 |
<0.01 |
|
<0.01 |
| 罗汉果+蔗糖 |
4.39±0.01 |
<0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 果糖 |
4.44±0.01 |
<0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 葡萄糖 |
4.45±0.02 |
<0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 甜菊糖 |
5.85±0.05 |
<0.01 |
<0.01 |
<0.01 |
| 罗汉果 |
7.15±0.01 |
>0.5 |
<0.01 |
| 阴性对照 |
7.40±0.01 |
讨论
本研究表明，与其他实验组相比罗汉果明显抑制了变链菌的生长、产酸和对玻棒的粘附，与阴性对照组相似，其在抑制变链菌致龋作用上更优于甜菊糖。
在变链菌对玻棒的粘附实验中，蔗糖组与罗汉果组有显著差别。这是因为变链菌合成的葡萄糖基转移酶(GTF)，可利用蔗糖合成葡聚糖与细菌某些表面物质特异性结合，促进了细菌的粘附和集聚，而罗汉果不能被GTF所利用。但实验结果同时显示了罗汉果与阴性对照组也有显著差别，这可能因为变链菌的粘附作用同时存在着蔗糖非依赖性机制所致［4］。
罗汉果为葫芦科植物，作为传统的中医药材广泛应用于临床。1978年日本竹本常松从中国的医药库中发掘此药材，发现其具有强烈甜味。一个干燥的罗汉果，平均以15g计，含有相当于500 g砂糖的甜味［5］。而罗汉果中起甜味作用的主要是罗汉果甙，为三萜甙类糖的衍生物，其分子结构中的0甙接果糖或葡萄糖［6，7］。为鉴别果糖和葡萄糖在此分子结构中的致龋作用，本实验特设果糖、葡萄糖实验组与罗汉果组相对照。结果所示罗汉果对变链菌的生长、产酸和对玻棒粘附的影响，均明显低于果糖和葡萄糖实验组。可见结合在罗汉果甙分子结构中的果糖、葡萄糖与游离状态的果糖、葡萄糖对变链菌生长的影响是不等同的。
罗汉果虽然甜度高，但甜味与蔗糖有别，喜好因人而异。作为添加剂，本实验结果提示罗汉果不宜与蔗糖配伍。
目前市场上出售除蔗糖外的主要甜味剂如糖精和甜蜜素(化学名为环己基氨基磺酸钠)均为人工化学合成品，寻找天然有抑制变链菌致龋作用的甜味物质，对保证机体健康是更为可靠的途径。
与蔗糖相比，罗汉果与甜菊糖都不能产生足够的热能。然而我们认为，现代饮食观念并不把甜味物质产能作为必要条件。因此罗汉果甜度高、粘性小、热值低并有抑制变链菌致龋作用等优点，提示了它可能作为无致龋性甜味剂的应用前景。此外，罗汉果清热解暑、清肺润肠、能防癌［8］的特点更使其具药食兼用的独特价值。
志谢 本实验承上海卫生防疫站丁锦春同志协助
参考文献
1岳松龄，主编.口腔内科学.第2版.北京：人民卫生出版社，1986.157.
2颜正华，主编.高等中医院校教学参考丛书.中药学.第1版.北京：人民卫生出版社，1995.630.
3刘天佳，杜和明，肖晓蓉，等.甜菊糖对变形链球菌的生长、产酸和粘附影响的体外实验.华西口腔医学杂志，1986，4：165-168.
4黄定明(综述).变形链球菌的粘附机理.国外医学口腔医学分册，1994，21：132-135.
5“全国中草药汇编”编写组编.全国中草药汇编.下册.第1版.北京：人民卫生出版社，1986.382.
6竹本常松，在原重信，中岛 正，他.罗汉果の成分研究(第2报)Mogroside类の化学构造.药学杂(日)，1983，103：1155-1166.
7刘斌，张训城，徐祥浩，等.广东中药志.第1卷.第1版.广州：广东科技出版社，1994.558-561.
8江西中医学院，主编.全国高等医药院校试用教材(中药专业用).第1版.上海：上海科学技术出版社，1982.217.
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